Lidské tělo


chromatografie

Výsledek chromatografie chlorofylu.
Automatizovaný kolektor frakcí pro chromatografické metody

Chromatografie (z řečtiny χρώμα – barva, γραφειν – psát) je souhrnné označení pro skupinu fyzikálně-chemickýchseparačních metod. Molekuly analytu se u všech typů chromatografických separací rozdělují mezi stacionární a mobilní fázi. Dělení je založeno na rozdílné distribuci složek směsi mezi mobilní a stacionární fázi. Postup vynalezl počátkem 20. století ruský přírodovědec Michail Cvět.

Chromatografické pojmy

Analyty – složky vzorku, které mají být chromatograficky rozděleny a identifikovány

Analytická chromatografie – chromatografie sloužící k zjištění existence analytu (kvalitativní stanovení) a k určení jeho koncentrace ve vzorku (kvantitativní stanovení).

Chromatograf – přístroj sloužící k chromatografické separaci složek vzorku

Chromatogram – záznam z chromatografu, znázorňující jednotlivé analyty nejčastěji ve formě chromatografických píků (zón) oddělených navzájem základní linií

Chromatografická separace – rozdělení vzorku na jednotlivé složky (analyty) na základě rozdílné distribuce mezi mobilní a stacionární fázi

Mobilní fáze (eluent) je fáze pohybující se chromatografickým systémem. Tato fáze přivádí vzorek do stacionární fáze, kde dochází k jeho separaci

Retenční čas – čas, který složka potřebuje k průchodu chromatografickým systémem

Preparativní chromatografie slouží k izolaci čistých (nebo alespoň čistějších) složek vzorku, které jsou dále použity (k chemické reakci, další separaci apod.)

Stacionární fáze – je fáze ukotvená na místě, přes kterou prochází mobilní fáze a také složky vzorku. Jde například o tenkou vrstvu silikagelu na inertním nosiči (při tenkovrstevné chromatografii) či kolonu naplněnou silikagélem. Zde dochází k separaci v důsledku distribuce vzorku mezi stacionární a mobilní fázi

Autosampler – automaticky dávkuje vzorky do přístroje

Rozdělení chromatografických metod podle uspořádání

  • sloupcová chromatografie (kolonová chromatografie, CC, column chromatography) – stacionární fáze je v koloně
  • papírová chromatografie (PP, paper chrom.) – stacionární fází je obvykle voda, adsorbovaná na papír
  • chromatografie na tenké vrstvě (TLC, thin layer chromatography) – stacionární fází je tenká vrstva adsorbentu anebo inertního nosiče, který váže kapalnou stacionární fázi

Rozdělení chromatografických metod podle mobilní fáze

  • plynová chromatografie (GC, gas chromatography) – mobilní fází je plyn
  • fluidní chromatografie – mobilní fáze je látka v nadkritickém stavu
  • plazmová chromatografie – mobilní fáze je proud iontů
  • kapalinová chromatografie (LC, HPLC, liquid chrom., vysokoúčinná kapalinová chrom.) – mobilní fází je kapalina.

Při kapalinové chromatografii je mobilní fází kapalina a stacionární fází je pevná látka (LSC) nebo kapalina, zakotvená na pevné látce (LLC).

Při LLC dochází k dělení složek analytu v důsledku různých hodnot jejich rozdělovacích koeficientů.

Při LSC dochází k dělení složek analytu v důsledku jejich různých adsorbčních vlastností.

Rozdělení kapalinové chromatografie podle principu dělení

  • adsorpční chromatografie – stacionární fáze je adsorbent.
  • iontová chromatografie – stacionární fáze je ionex.
  • gelová chromatografie nebo gelová filtrační chromatografie – stacionární fáze je neionizovaný přírodní nebo syntetický gel.
  • afinitní chromatografie – stacionární fáze obsahuje zakotvené ligandy, na které se rozdělovaná látka váže.
  • rozdělovací chromatografie – o separaci rozhoduje různá rozpustnost složek vzorku v stacionární a mobilní fázi

Rozdělení chromatografie podle podmínek

  • izokratická chromatografie – konstantní podmínky
  • gradientová chromatografie – mění se podmínky, např. teplota nebo složení mobilní fáze.

Galerie


Pojem naleznete v následujících článcích:

  • Proteiny

    Proteiny

    Trojrozměrná struktura proteinu Bílkoviny, odborně proteiny (z řeckého πρώτειος próteios „prvotní, primární, hlavní“), patří mezi biopolymery. Proteiny se řadí mezi makromolekuly, které obsahují jeden nebo více dlouhých řetězců…

    číst více…